TỐI ƯU HOÁ KỸ THUẬT ELISA
Các xét nghiệm miễn dịch liên kết với enzyme, được biết đến như là Elisa (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay), là phương pháp phổ biến để phát hiện và định lượng một chất phân tích đích trong mẫu. Mặc dù các ELISA phụ thuộc vào việc sử dụng kháng thể liên kết với enzyme để tạo tín hiệu, kỹ thuật này đã phát triển đáng kể và các máy đọc hiện nay có sẵn trên thị trường. Theo đó, thuật ngữ ELISA hiện nay được sử dụng rộng rãi để mô tả bất cứ xét nghiệm miễn dịch nào thực hiện trong đĩa mà trong đó một thành phần của thử nghiệm được hấp thụ lên bề mặt rắn. ELISA cung cấp rất nhiều lợi thế như độ nhạy cao và đọc định lượng, hơn nữa nó sử dụng đơn giản và dễ dàng thích nhi với công việc sàng lọc mẫu lớn, các tính năng thường làm nó trở thành nền tảng của sự lựa chọn cho các chương trình khám phá dược phẩm.
Elisa có nhiều ưu điểm bao gồm độ nhạy cao và đọc định lượng
ELISA có thể được thực hiện theo nhiều cách khác nhau, nhưng không phân biệt phương pháp đã chọn, xét nghiệm sẽ liên quan đến một số bước chính như là cố định kháng thể hoặc kháng nguyên trên đĩa (microplate), ngăn chặn sự liên kết không đặc hiệu, ủ với mẫu thử nghiệm, ủ với các thuốc thử phát hiện có liên quan. Các bước rửa bao gồm trong suốt quá trình và được tối ưu hoá để đảm bảo kết quả đọc tối đa trong khi tín hiệu nền được giữ ở mức tối thiểu. Trong quá trình phát triển của ELISA, các nhà nghiên cứu sẽ so sánh các thông số khác nhau để xác định những yếu tố tạo ra một quuy trình xét nghiệm tối ưu, những yếu tố cần quan tâm:
- Lớp phủ đĩa (plate coating)– lựa chọn đệm phủ, nồng độ chất bắt giữ, thời gian ủ và nhiệt độ.
- Rửa – lựa chọn đệm rửa; số lượng, thời gian và thể tích rửa.
- Chặn (blocking) – chất ngăn chặn. nồng độ thuốc thử chặn, thời gian ủ và nhiệt độ.
- Mẫu ủ – mẫu phân tích, bao gồm các kiểm soát tiêu chuẩn liên quan, thời gian ủ và nhiệt độ
- Phương pháp phát hiện – chỉ thị màu, fluorometric hoặc chemiluminescent, yêu cầu ghép kênh, sử dụng liên kết biotin-streptavidin để tăng tín hiệu.
ELISA thành công và có khả năng tái tạo phụ thuộc vào các chất thử kháng thể có chất lượng, độ nhạy và độ đặc hiệu cao.
Camilo, giám đốc nghiên cứu tại Rockland, giải thích rằng ‘ trong một kháng thể có thể nhận ra được mục tiêu của nó trong Western blot, thì kết quả này không thể chuyển thành kết quả tương tự trong ELISA. Rockland phát triển các kháng thể phù hợp cho mục đích và để đảm bảo các chức năng này trong các đợt kiểm tra thì chúng cần phải được xác nhận trong các đợt kiểm tra mà chúng đã được thiết kế cho. Quy trình kiểm tra kháng thể của Rockland bao gồm các xét nghiệm mở rộng trong các ứng dụng khác nhau như ELISA, IHC và Western blot, cho phép chúng tôi cung cấp các kháng thể được khuyến cáo và khảo sát các quy trình cụ thể giúp tối ưu hoá cho người dùng.
Tính đồng nhất và khả năng lặp lại nhiều lần đảm bảo rằng bằng cách áp dụng các tiêu chuẩn nghiêm ngặt đối với sản phẩm cuối cùng. Bước tối ưu hoá kỹ thuật rất quan trọng trong phương pháp ELISA, chúng liên quan đến việc xác định nống độ lý tưởng cho các thành phần chủ yếu như xét nghiệm kháng nguyên và kháng thể, tối ưu hoá.
Theo Dan Keefem chủ tịch Eagle Biosciences, việc sử dụng bộ dụng cụ được tối ưu hoá trước có thể tiết kiệm thời gian đáng kể. “ Các bộ dụng cụ ELISA của chúng tôi được cung cấp thông tin chi tiết bao gồm: độ nhạy, độ đặc hiệu, dải động và mẫu thích hợp, cũng như dữ liệu đường cong tiêu chuẩn điển hình và một quy trình toàn diện cho khách hàng của chúng tôi mức độ tự tin cao trong phân tích mẫu và cho phép họ tiến hành nghiên cứu của họ một chách hiệu quả”, Keefe giải thích.
Aviva Systems Biology vừa đưa ra một loạt các bộ dụng cụ ELISA, cho phép đo lường định lượng các mục tiêu quan tâm cao bao gồm cytokines, chemokines, các yếu tố tăng trưởng, amin sinh học, protein huyết thanh/huyến tương và các dấu hiệu của bệnh truyền nhiễm. Danh mục ELISA của Aviva hiện đang phục vụ cho hơn 8000 mục tiêu khảo sát.
Theo Matt Landry, Phó chủ tịch tiếp thị và bán hàng tại Aviva, ‘một bài kiểm tra ELISA phát triển tốt sẽ đủ mạnh để các biến thể nhỏ trong các quy trình khảo nghiệm sẽ có ảnh hưởng tối thiểu đến kết quả. Một quá trình tối ưu hoá đã được thực hiện bởi đội ngũ chuyên nghiệp của chúng tôi, tiết kiệm thời gian và tiền bạc của khách hàng, cung cấp cho họ một sản phẩm tiện lợi, dễ sử dụng. Bộ dụng cụ ELISA của chúng tôi được cung cấp với các giao thức đã được kiểm chứng đầy đủ, bộ dụng cụ tối ưu.
ELISA là một kỹ thuật cực kỳ mạnh mẽ, có thể áp dụng cho một phạm vi gần như vô hạn các mục tiêu, tuy nhiên cần phải cẩn thận tối ưu từng giai đoạn của bài kiểm tra, sử dụng thuốc thử chất lượng cao thích hợp vào thự hiện theo các phương pháp thử nhất quán để đạt được tái sản xuất.
Bài viết này chúng tôi lược dịch bài gốc “Optimal Elisa” của Emma Easthope. Rất hy vọng bài viết sẽ giúp ích cho quý khách khi thực hiện kỹ thuật elisa.
