Làm thế nào để đảm bảo chất lượng của dòng tế bào nuôi cấy
Nuôi cấy tế bào có thể là công việc đòi hỏi sự khôn lanh. Chúng có nguồn gốc từ sinh vật sống, chúng có nhu cầu cụ thể cho phép chúng phát triển trong điều kiện nhân tạo thuận lợi. Đảm bảo môi trường giàu chất dinh dưỡng và kiểm soát nhiệt độ trong các điều kiện được lựa chọn là một sự khởi đầu tốt. Nhưng làm thế nào để duy trì và đảm bảo chất lượng của dòng tế bào nuôi cấy qua đó bạn có thể thực hiện một thử nghiệm thành công?
Tế bào là một trong những công cụ chính được sử dụng trong nghiên cứu cơ bản và phát triển dược phẩm, các quy trình và các phương thức chuẩn đã được tạo ra cho các loại tế bào khác nhau. Các quy trình xác định đặc tính tế bào có thể giúp duy trì các tế bào phải cho thử nghiệm của bạn. Tuy nhiên, tế bào là những sinh vật sống và do đó tự nhiên có một số thay đổi trong cách chúng phát triển và điều gì làm họ hạnh phúc.
Dưới đây là một số lời khuyên hữu ích từ Alison Killilea, giám đốc của Đại học California, Cơ sở nuôi cấy Tế bào Berkeley, và Kevin Grady, giám đốc kinh doanh dòng sản phẩm tại ATCC, để giữ cho tế bào khỏe mạnh dựa trên những thách thức phổ biến phát sinh trong nuôi cấy tế bào.
Giải quyết vấn đề nhiễm khuẩn tế bào
Môi trường bị nhiễm có thể làm cho tế bào suy yếu và chết đi, hoặc có thể thay đổi mô hình biểu hiện và hiệu quả thẩm thấu ảnh hưởng đến kết quả thực nghiệm. Mycoplasma là một thách thức đối với các phòng thí nghiệm nuôi cấy tế bào bởi sự nhiễm trùng không nhìn thấy được. Một cuộc thử nghiệm phát hiện mycoplasma dựa trên PCR có thể được chạy hoặc cần phải sử dụng một vết ố hạt nhân để hình dung việc nhuộm các màng tế bào nơi đặt mycoplasma. Tất cả các môi trường phải được kiểm tra mycoplasma trước khi sử dụng, đặc biệt nếu nhận được từ phòng thí nghiệm khác.
Để loại bỏ sự nhiễm bẩn, pen/strep là một chất phụ gia phổ biến cho môi trường. Tuy nhiên, phải cẩn thận trước việc sử dụng kháng sinh do áp lực lên tế bào, thay đổi lựa chọn và chức năng của chúng. Pen/strep cũng có thể không phát hiện và và nhiễm khuẩn vẫn xuất hiện, khiến nó lây lan. Thay vào đó, đảm bảo các kỹ thuật vô trùng được sử dụng để ngăn ngừa bất kỳ sự nhiễm bẩn ngay từ đầu.
Các kỹ thuật vô khuẩn có thể là khía cạnh quan trọng nhất của bất kỳ quy trình nuôi cấy tế bào. Sử dụng cồn 70% để tiệt trùng trước và sau khi sử dụng, đeo găng tay, mũ trùm và xịt chai nhựa trước khi mở. Các kỹ thuật vô khuẩn như vậy giữ cho tế bào lành và không nhiễm bẩn mà không cần sử dụng pen/strep.
Hiểu tế bào của bạn
Để duy trì sự nuôi cấy thích hợp, luôn luôn sử dụng, các điều kiện được đề nghị. Một số tế bào sinh sôi nảy nở tốt hơn trong môi trường cụ thể phù hợp với chúng. Tuy nhiên, một số điều kiện thực nghiệm nhất định có thể làm ảnh hưởng đến tế bào. Các tế bào thưa thớt sẽ không khỏe do sự giảm số lượng các yếu tố tăng trưởng và các hoóc môn khác được giải phóng bởi một số lượng tế bào ít hơn. Để khắc phục vấn đề này nếu cần có tế bào mỡ, sử dụng 20% điều kiện môi trường cũ với 80% điều kiện môi trường mới khi đi qua tế bào để tạo ra sự phát triển ban đầu của hoóc môn giúp tế bào cảm thấy thoải mái trong môi trường mới.
Huyết thanh thai bò (FBS) là một môi trường tăng trưởng quan trọng cho nuôi cấy tế bào có chứa nồng độ kháng thể thấp và các yếu tố tăng trưởng khác, cho phép linh hoạt trong các ứng dụng nuôi cấy tế bào khác nhau. Kiểm tra và sàng lọc FBS giúp đảm bảo tế bào khỏe mạnh bằng cách giữ cơ sở dinh dưỡng ổn định trên khi cấy chuyển.
Duy trì và bảo quản dòng tế bào
Các kỹ thuật đông lạnh và rã đông có thể bắt đầu các tế bào mới, hoặc gây chết tế bào. Các tế bào đông lạnh nên xảy ra ở tốc độ 1 độ mỗi phút bằng các thiết bị làm mát chậm. Điều này tạo ra một sự đông cứng thậm chí giữa các tế bào và giới hạn sự hình thành tinh thể đá. Tủ lạnh đáng tin cậy sẽ giữ cho tế bào ở trạng thái không đổi mà không gây ra các chu kỳ đóng băng / tan băng.
Ngược lại, việc tan băng nên xảy ra nhanh chóng trong một bồn nước 37o sau khi tái huyền dịch hóa trong môi trường tăng trưởng. Các phương thức chuẩn được tạo ra để giữ cho các tế bào ở trạng thái tốt nhất.
Kiểm soát môi trường
Thói quen kiểm tra môi trường thường xuyên được đánh giá cao để kiểm tra độ sạch sẽ trong phòng thí nghiệm. Để một đĩa thạch mở nắp trong tủ thao tác, khi đang vận hành dòng khí sạch, sau đó ủ đĩa thạch này. Nó sẽ là bằng chứng rõ ràng nếu moi trường đã được làm sạch đúng cách. Cùng một thử nghiệm có thể được thực hiện với tủ ấm, lưu trữ một chai môi trường mở trong một khoảng thời gian. Đảm bảo việc sử dụng các tủ an toàn sinh học cao cấp có lưu thông tốt là một đặc điểm quan trọng của bất kỳ phòng thí nghiệm nuôi cấy tế bào nào để duy trì nuôi cấy tế bào khỏe mạnh mà không ảnh hưởng đến môi trường bên ngoài.
Thực hiện kiểm tra tạo khí CO2 và biến đổi nhiệt độ có thể là một khía cạnh quan trọng trong việc giữ cho tế bào tốt. Nếu môi trường bên ngoài của chúng không ổn định, thì chúng cũng sẽ không phát triển được. Do đó, lựa chọn một tủ nuôi cấy tế bào có chất lượng để duy trì lượng CO2 và các mức nhiệt độ liên tục có thể tiết kiệm được thời gian và các dòng tế bào tiềm năng.
Duy trì nuôi cấy tế bào cần thời gian, sự kiên nhẫn, và các kỹ thuật thích ứng để tạo ra môi trường thích hợp cho tế bào phát triển tốt. Một khi đã thành thạo, nuôi cấy tế bào khỏe mạnh có thể là chìa khoá cho một thử nghiệm thành công.
Trên đây là bài viết về làm thế nào để đảm bảo chất lượng của dòng tế bào nuôi cấy. bài này chúng tôi viết theo bài gốc trên trang Biocompare. Rất hy vọng bài viết này sẽ hữu ích cho quí khách. Nếu quí khách có bất cứ câu hỏi hay thắc mắc nào liên quan tới chủ đề này xin vui lòng liên hệ với chúng tôi qua email: info@bimetech.vn.