Kỹ thuật nhuộm Ziehl Neelsen
Phương pháp nhuộm Ziehl Neelsen được phát triển bởi hai nhà khoa học là Ziehl và Neelsen. Trong phương pháp này Neelsen đã sử dụng Ziehl’s carbol-fuchsin và nhiệt và sau đó khử màu với cồn axit, và đếm các tế bào được nhuộm màu với methylene blue. Mục đích của kỹ thuật này để phân biệt nhóm vi khuẩn bền vững với axit (acid-fast bacteria) và không bền vững với axit. Phương pháp này đặc biệt hữu ích để xác định các vi khuẩn thuộc chi Mycobacterium như M. tuberculosis, M. ulcerans, và M. leprae và mycobacteria không gây hại do chúng không thể được nhuộm bằng phương pháp gram thông thường.
Nguyên lý của phương pháp nhuộm Ziehl Neelsen
Khi tiêu bản được nhuộm với carbol fuchsin, nó hòa tan vật liệu lipid có mặt trong thành tế bào Mycobacterial bởi nhiệt. Carbol fuchsin tiếp tục xuyên qua thành lipid và tiến vào tế bào chất. Do đó tất cả tế bào có màu đỏ. Mẫu tiêu bản sau đó được khử màu với hóa chất (3% HCL trong cồn 95%) nhưng những tế bào bền với axit vẫn có màu đỏ do sự có mặt của lượng lớn vật chất lipid trong thành tế bào bởi vậy ngăn chặn sự đi qua của dung dịch khử màu. Những tế bào không bền với axit thiếu vật liệu lipid trong thành tế bào bởi vậy chúng dễ dàng bị khử màu, dẫn đến tế bào không có màu. Tiêu bản tiếp tục được nhuộm với methylene blue. Chỉ những tế bào đã khử màu mới hấp thụ và nhuộm màu xanh methylene và có màu xanh trong khi các tế bào bền với axit có màu đỏ.
Quy trình nhuộm AFB staining
- Chuẩn bị tiêu bản vi khuẩn trên lam sạch không chứa dầu, sử dụng kỹ thuật vô trùng.
- Để tiêu bản khô trong không khí và sau đó cố định bằng nhiệt.
- Bổ sung thuốc nhuộm carbol fuchsin lên mẫu tiêu bản.
- Làm ấm thuốc nhuộm đã nhỏ trên lam cho tới khi hơi bắt đầu bay lên (khoảng 60 độ). Không làm nóng quá. Để thuốc nhuộm đã làm ấm vẫn trên lam kính trong năm phút.
- Rửa tiêu bản với nước sạch.
- Nhỏ lên tiêu bản dung dịch khử màu (3% v/v axit cồn) trong 5 phút hoặc cho tới khi đủ thời gian để khử mầu mẫu tiêu bản (màu hồng nhạt).
- Rửa kỹ với nước sạch.
- Nhỏ xanh methylene lên tiêu bản và để từ 1-2 phút.
- Rửa sạch mẫu tiêu bản với nước sạch.
- Lau sạch mặt sau lam kính và để nó lên giá và đợi khô.
- Kiểm tra tiêu bản trên kính hiển vi, sử dụng vật kính dầu 100X.
Bộ kit nhuộm Ziehl Neelsen
- Hãng sản xuất: Nam Khoa
- Nước sản xuất: Việt Nam
- Bộ kít đạt các chứng chỉ kiểm định chất lượng
Hãy liên hệ với chúng tôi để nhận được tư vấn chi tiết về sản phẩm. Ngoài ra chúng tôi còn cung cấp nhiều hóa chất thiết bị khác như: vitamin B1, RBA agar, sabouraud glucose agar, myo-inositol… Chúng tôi rất mong nhận được sự hỗ trợ của Quí khách hàng.
