Hóa chất Trypan Blue

Hóa chất Trypan Blue

Thử nghiệm loại trừ thuốc nhuộm được sử dụng để xác định số lượng tế bào sống có mặt trong mẫu huyền dịch tế bào. Nó dựa vào nguyên lý rằng tế bào sống sở hữu màng tế bào toàn vẹn do đó loại trừ một số thuốc nhuộm nhất định như: trypan blue, Eosin, hoặc propidium, trong khi đó tế bào chết thì không mang đặc tính này. Trong thử nghiệm này, huyền dịch tế bào chỉ cần đơn giản được trộn với thuốc nhuộm sau đó được kiểm tra để xác định xem tế bào nào hấp thụ hoặc không hấp thụ thuốc nhuộm. Do đó trong quy trình này tế bào sống sẽ có tế bào chất trong không bắt màu thuốc nhuộm và ngược lại tế bào chết sẽ có màu xanh của trypan blue.

Quy trình tính tỷ lệ tế bào sống

Vật liệu:

PBS hoặc môi trường không chứa huyết thanh
Trypan blue nồng độ 0.4% (bảo quản trong lọ tối và lọc sau đó bảo quản lâu dài)

Quy trình nhuộm sống chết bằng trypan: 

1. Ly tâm một phần huyền dịch tế bào cho thử nghiệm sống chết trong 5 phút ở tốc độ 100g sau đó loại bỏ dịch nổi. Lượng huyền dịch được ly tâm cho thử nghiệm phụ thuộc vào mật độ tế bào. Lượng tế bào cần đủ để có thể đếm trong buồng đếm sau khi đã huyền dịch hóa với 1ml PBS và sau đó lại pha loãng với trypan blue 0.4% (ví dụ, 5 ×10⁵ tế bào/ml).
2. Tái huyền dịch hóa cặn tế bào trong 1 ml PBS hoặc môi trường không huyết thanh. Các protein trong huyết thanh bắt màu nhuộm với trypan blue và có thể dẫn đến kết quả nhiễu. Việc xác định phải được thực hiện trong môi trường không có huyết thanh.
3. Trộng một phần trypan blue 0.4% và một phần huyền dịch tế bào (pha loãng tế bào). Ủ hỗn hợp khoảng 3 phút ở nhiệt độ phòng. Tế bào nên được đếm trong 3-5 phút sau khi trộn với trypan blue, vì nếu ủ lâu hơn sẽ dẫn tới gây chết tế bào và giảm số lượng tế bào sống. Việc trộn hỗn hợp có thể được thực hiện trong đĩa vi giếng hoặc một ống nhựa nhỏ sử dụng 10 tới 20 µl huyền dịch tế bào với trypan blue.
4. Bổ sung một giọt hỗn hợp blue và tế bào vào buồng đếm. Đặt buồng đếm lên bệ kính hiển vi hai mắt và lấy tiêu cự để quan sát tế bào.
5. Đếm tế bào không nhuộm (sống) và tế bào được nhuộm màu (chết) trong buồng đếm.
6. Tỷ lệ % tế bào sống được tính bằng phương pháp như sau:

Tỷ lệ tế bào sống (%) = (tổng số tế bào sống trong 1ml chia cho tổng số toàn bộ tế bào trong 1ml) × 100

Trypan Blue powder, BioReagent, suitable for cell culture

• Hãng sản xuất: Sigma
• Nước sản xuất: Đức
• Dạng: Bột
• Đóng gói: 5, 25, 100 g
• Công thức phân tử: C₃₄H₂₄N₆O₁₄S₄Na₄
• Trọng lượng phân tử: 960.81
• Độ tan: 10 mg/mL
• Mã sản phẩm: T6146-5G; T6146-25G; T6146-100G
• Ngoài loại bộ chúng tôi còn cung cấp loại dịch 0.4%.

Hãy liên hệ với chúng tôi để nhận được thông tin tư vấn chi tiết về sản phẩm. Ngoài ra chúng tôi còn cung cấp nhiều hóa chất thiết bị khác như: tủ ấm, tủ sấy, que cấy khuẩn… Chúng tôi rất mong nhận được sự hỗ trợ và ủng hộ của Quí khách.